CARACTERIZAÇÃO DE NOVOS INIBIDORES DA PROTEASE PRINCIPAL (MPRO) DO SARS-COV-2 SELECIONADOS POR INTELIGÊNCIA ARTIFICIAL

A COVID-19, causada pelo coronavírus da síndrome respiratória aguda severa 2 (SARS-CoV-2), é responsável por milhões de mortes no mundo. Um dos fármacos usados no tratamento dessa doença é o Paxlovid (nirmatrelvir + ritonavir), que apresenta como alvo molecular a protease principal (Mpro), uma enzima essencial para o ciclo de vida do vírus. Contudo, a ocorrência de variantes mutantes de Mpro menos sensíveis ao nirmatrelvir e o possível aparecimento de novas mutações justificam a busca por novos inibidores dessa enzima. Anteriormente nosso grupo identificou, a partir modelos de inteligência artificial generativos, fragmentos moleculares inibidores de Mpro. Neste trabalho, iniciou-se a caracterização da atividade inibitória de um desses fragmentos, o composto 183. Para isso, foram expressas as formas recombinantes selvagem e mutantes (E166N, Q192V e H172Y) de Mpro de SARS-CoV-2 na cepa Rosetta 2 (DE3) de Escherichia coli. Em seguida, a versão selvagem da enzima foi purificada através da técnica de cromatografia de afinidade, apresentando peso molecular e atividade catalítica compatíveis com a Mpro viral. Com a enzima pura, foi realizado um teste de reversibilidade com o composto 183, permitindo determinar seu perfil de inibição como irreversível, o que está de acordo com dados cristalográficos obtidos pelo nosso grupo. O próximo passo deste trabalho é finalizar o processo de purificação das mutantes, além de determinar parâmetros cinéticos de inibição, como Ki e kinact, para melhor caracterizar a interação entre a Mpro e o composto 183.