EXPRESSÃO, PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E FUNCIONAL DO MUTANTE C135S DO FATOR NEUROTRÓFICO DOPAMINA CEREBRAL (CDNF)

Fatores Neurotróficos (FNs) são proteínas cruciais para o desenvolvimento e a manutenção de neurônios e de outras células. O CDNF é um FN não convencional, conhecido por seu papel na mitigação do estresse do retículo endoplasmático (RE), particularmente em neurônios dopaminérgicos que são danificados na doença de Parkinson (DP). O CDNF inteiro (CDNF-FL) é composto por 161 aminoácidos, organizados em 7 alfa-hélices e 4 pontes dissulfeto e apresenta dois domínios conectados por uma região flexível (linker). O domínio N-terminal (CDNF-N) inclui os primeiros 100 aminoácidos, com 5 alfa-hélices e 3 pontes dissulfeto. O domínio C-terminal (CDNF-C) contém os 57 aminoácidos restantes, com 2 alfa-hélices, uma hélice 310 e uma única ponte dissulfeto. Ultimamente, nossos esforços demonstraram que CDNF-C é o domínio citoprotetor de CDNF. Eesmaa e colaboradores, usando a proteína inteira, demonstrou que a troca da cisteína, resíduo 135, por uma serina (FL-C135S), desfazendo a ponte dissulfeto, diminui significativamente seu potencial citoprotetor. Assim, esse trabalho teve por objetivo expressar, purificar e caracterizar estruturalmente (através de técnicas de fluorescência, dicroísmo circular e RMN) e funcionalmente (por meio de culturas de células modelo da DP) o papel da ponte dissulfeto do domínio CDNF-C isolado, utilizando o mutante CDNF-C /C135S.